单一固定液的性质和用途

1. 乙醇（C2H5OH）

乙醇，又称为酒精，具有沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白的功能，但后者易溶于水，因此使用酒精固定的标本在细胞核染色方面表现欠佳。酒精能够溶解脂肪和类脂体，因此不适合用于脂肪的固定。它能够沉淀肝糖，但在水中仍然可溶，因此肝糖经酒精固定后应当避免在低于70%的酒精中保存。单独使用时，酒精的浓度需在95%至100%之间。无水乙醇渗透性较差，且会导致组织收缩，混合使用时与醋酸、氯仿等增强其穿透能力。除了固定，酒精还具有硬化和脱水的作用，固定后的组织可存于70%的酒精中，广泛应用于制片过程中。由于无水乙醇易挥发且吸湿，瓶盖应严密关闭，建议在瓶中加入少量无水硫酸铜粉末以去除水分。请注意，酒精是还原剂，不可与重铬酸钾和锇酸等氧化剂共同使用。

2. 甲醛（HCHO）

甲醛作为气体溶于水时形成甲醛水溶液或福尔马林，常用浓度为10%的福尔马林（实为4%甲醛）。其制备方法为将10ml市售甲醛与90ml蒸馏水混合。虽然甲醛无法沉淀白蛋白和核蛋白，但可与蛋白质结合。此固定液广泛应用、使用简单，具备较强穿透力、均匀固定、组织收缩小以及适当硬度，非常适合一般器官组织的固定与保存，尤其对脂肪和神经组织的效果显著。对于病理组织的制片和大体积标本的保存更为合适。一般需固定24小时以上，随后可逐步转入50%酒精进行脱水。甲醛为强还原剂，不应与铬酸、重铬酸钾和锇酸等氧化剂混合，且因易被氧化成甲酸，其混合固定液如海利氏液需临用前加入。为了应对长期储存带来的多聚甲醛问题，可以加入少量醋酸钙、碳酸镁或大理石作为中和剂。配制10%中性甲醛溶液的方法为：将40%甲醛100ml、蒸馏水900ml，以及磷酸二氢钠和磷酸氢二钠配置。

3. 醋酸（CH3COOH）

醋酸在低温下呈冰状，因此被称为冰醋酸，在17℃融化后可与水和乙醇相混合。使用浓度为0.3%至5%，能有效沉淀核蛋白，对染色质固定效果良好，且可近似保持染色体于活体状态，常用于染色体的固定液中。由于醋酸渗透力强，可以使组织膨胀并与其他药剂配合使用，减轻其他固定剂的组织收缩作用。然而，醋酸会破坏线粒体和高尔基体，所以在进行这些细胞结构的固定时需避免使用。

4. ku味酸（C6H2（NO2）3OH）

ku味酸是一种强酸，呈黄色结晶，溶于水、乙醇、苯等溶剂。它具有自燃和爆炸的潜在危险，因此需要保存湿润。一般采用饱和水溶液，能有效沉淀蛋白质，对胞质固定较为优越。不过，其渗透速度较慢且会导致组织强烈收缩，通常与醋酸等药剂合用。固定后组织会呈现黄色，但对染色影响不大。

5. 重铬酸钾（K2CrO7）

重铬酸钾是一种呈橙红色的结晶，具有毒性且为强氧化剂，不应与酒精混合。其渗透力强，能将蛋白质变为不溶性，保持细胞质结构与活体状态相似，适合用于线粒体和高尔基复合体的固定，但需与其他固定液如甲醛配合使用。固定后的组织需经流水冲洗12至24小时。

6. 铬酸（H2CrO4）

铬酸是一种强氧化剂和弱酸，极易潮解，最佳保存形式为1%的水溶液。其为优秀的沉淀剂，固定肝糖效果显著，能使肝糖不溶于水，适用于线粒体和高尔基复合体的固定。铬酸的渗透力较低，不会导致组织收缩。固定后需用流水冲洗超过12小时，否则可能造成沉淀，影响染色。

7. 氯化汞（HgCl2）

氯化汞，又称升汞，是一种极毒的药物，对黏膜有腐蚀性，使用时须格外小心。它能沉淀所有蛋白质，促使蛋白质变性为水不溶性，对组织固定效果显著，并有助于线粒体和高尔基体固定。因其穿透力较弱且收缩力较强，常与醋酸、甲醛等混合使用。固定后的组织通常需要用碘酒处理去除沉淀物。

8. 四氧化锇（OsO4）

四氧化锇或锇酸是一种强氧化剂，固定脂肪的最佳选择。其渗透速度缓慢，但能均匀固定蛋白质，并保留细胞形态，不会引起细胞收缩，特别适用于线粒体和高尔基复合器的固定。该固定液的处理需谨慎，以避免对眼睛和呼吸道的伤害。锇酸固定的切片在染色前需漂白，以确保颜色的一致性。

总的来说，各种固定液各有优缺点。酒精适用于肝糖的固定，但不适合脂肪。锇酸能固定脂肪，而氯化汞对蛋白质的固定效果良好，冰醋酸则适合核蛋白。为了获得最佳固定效果，可以根据需要组合不同的固定液。了解这些药品的性质是确保成功实验的关键。选择合适的固定液时，可以参考制片专业书籍，以确保选用的固定液能满足实验目的并进行适当的预处理和冲洗。

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